WO2010024138A1 - エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤 - Google Patents

エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2010024138A1
WO2010024138A1 PCT/JP2009/064335 JP2009064335W WO2010024138A1 WO 2010024138 A1 WO2010024138 A1 WO 2010024138A1 JP 2009064335 W JP2009064335 W JP 2009064335W WO 2010024138 A1 WO2010024138 A1 WO 2010024138A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
glucosyltransferase
trimer
egcg
epigallocatechin gallate
Prior art date
Application number
PCT/JP2009/064335
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
祐子 福井
道代 仲野
隆 大嶋
Original Assignee
サントリーホールディングス株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by サントリーホールディングス株式会社 filed Critical サントリーホールディングス株式会社
Priority to ES09809791.8T priority Critical patent/ES2619525T3/es
Priority to CN2009801339636A priority patent/CN102137853B/zh
Priority to US13/061,073 priority patent/US9237996B2/en
Priority to EP09809791.8A priority patent/EP2330104B1/en
Publication of WO2010024138A1 publication Critical patent/WO2010024138A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
    • A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • C07D311/60—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2
    • C07D311/62—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2 with oxygen atoms directly attached in position 3, e.g. anthocyanidins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches

Definitions

  • the present invention relates to a glucosyltransferase inhibitor containing an epigallocatechin gallate polymer as an active ingredient, and a food or drink to which this is added.
  • the caries generation mechanism is as follows.
  • the oral streptococci especially Streptococcus mutans (Streptococcus mutans, hereinafter referred to as "S ⁇ mutans”.
  • Glucosyltransferase which is produced (glycosyltransferase, GTF) is, the mouth of sucrose as the substrate, the pressure-sensitive adhesive It produces sex-insoluble polysaccharides (glucans).
  • GTF glycose
  • mutans adhere to the tooth surface by the generated glucan to form a bacterial mass (plaque).
  • various microorganisms such as S. mutans coexist and proliferate, but organic acids are produced by the metabolism of these microorganisms, and the pH inside the plaque is lowered by the action of these organic acids, and tooth enamel Decalcification occurs on the surface of the material, causing caries and progressing. Plaque formation is considered to cause periodontal disease and bad breath in addition to caries.
  • the plaque formed by oral streptococci centered on S. mutans causes caries, it is effective to suppress the formation of dental plaque and thus prevent the occurrence of caries. It can be a means.
  • Patent Document 1 discloses that a flavonoid polymer having a molecular weight of 800 to 5000 produced by treating a flavonoid (a kind of catechin) with peroxidase has an enhanced inhibitory action on glucosyltransferase as compared with that before the treatment. It has been reported.
  • Non-Patent Document 1 reports that a flavonoid polymer inhibits the activity of a glucosyltransferase derived from Streptococcus sobrinus by 50% at 2.5 ⁇ g / mL.
  • Patent Document 2 discloses that a flavonoid polymer having a weight molecular weight of 1000 to 10,000 produced by condensing reduced products of flavanones / flavanols or leucocyanidines with catechins has an inhibitory action on glucosyltransferase. Has been reported.
  • these flavonoid polymers are a mixture of flavonoids in a 3 to 5 mer or a mixture of 2 to 3 mers, and various compounds contained in the mixture have not been isolated.
  • the glucosyltransferase inhibitory activity for each of the simple substances has not been clarified.
  • Non-Patent Document 2 It has been reported that among edible teas, a mixture of catechins derived from green tea, which is non-fermented tea, has a glucosyltransferase inhibitory effect (Non-Patent Document 2). However, it has also been reported that sufficient anti-caries activity was not obtained in a test using rats.
  • Patent Document 3 Non-Patent Document 3, Non-Patent Document 4, and Non-Patent Document 5
  • Patent Document 4 heat treatment of green tea, oolong tea, and black tea enhances glucosyltransferase inhibitory activity
  • Patent Document 5 heat treatment of catechins enhances glucosyltransferase inhibitory activity.
  • JP-A-6-247959 Japanese Patent Laid-Open No. 7-242556 JP-A-6-279302 JP-A-3-284625 JP-A-3-284671
  • the inventors of the present invention have intensively studied paying attention to the components contained in tea that is drunk daily, considering that it is used as a food and drink, and are a kind of catechins contained in oolong tea ( ⁇ )-epi.
  • the EGCG polymer obtained by polymerizing gallocatechin-3-O-gallate (hereinafter also referred to as EGCG) has been found to have a strong glucosyltransferase inhibitory activity, particularly to the EGCG trimer, leading to the present invention. It was.
  • the present invention is as follows. 1. A glucosyltransferase inhibitor comprising epigallocatechin gallate trimer or a salt thereof as an active ingredient. 2. 2. The glucosyltransferase inhibitor according to 1 above, wherein the epigallocatechin gallate trimer is a compound bonded via a methylene group at the 6-position and / or 8-position of the chroman ring. 3.
  • the epigallocatechin gallate trimer has the following formula (I):
  • R represents the following formula (A):
  • the glucosyltransferase inhibitor which uses the compound represented by these as an active ingredient. 5).
  • An anti-cariogenic agent comprising epigallocatechin gallate trimer or a salt thereof as an active ingredient. 6).
  • 6. The anticaries agent according to 5 above, wherein the epigallocatechin gallate trimer is a compound bonded via a methylene group at the 6-position and / or 8-position of the chroman ring. 7).
  • the epigallocatechin gallate trimer is a compound having the formula (I), a compound having the formula (II), and a compound having the formula (III) (in the formulas (I) to (III), R is 7.
  • the anti-cariogenic agent according to 6 above which is a compound selected from the group consisting of: a galloyl group represented by the formula (A). 8).
  • An anticaries agent comprising the compound represented by the formula (IV) as an active ingredient.
  • a food or drink to which the glucosyltransferase inhibitor or anti-cariogenic agent according to any one of 1 to 8 above is added.
  • 10. The food or drink according to 9 above, wherein the food or drink is a tea drink.
  • the present inventors have found that ( ⁇ )-epigallocatechin-3-O-gallate (EGCG) polymers, particularly specific EGCG dimers and trimers, have a high glucosyltransferase inhibitory action. It was. As described above, glucosyltransferase (hereinafter also referred to as GTF) produces glucan that causes plaque in the mouth, and thus caries can be prevented by inhibiting the activity of GTF. Therefore, the GTF inhibitor of the present invention can be used as an anticaries agent. Moreover, since the GTF inhibitor of this invention suppresses the production
  • GTF glucosyltransferase
  • the GTF inhibitor of the present invention is derived from EGCG contained in foods and drinks for daily eating and drinking such as oolong tea, it has high palatability and high safety for the human body. Moreover, by containing a certain amount of this GTF inhibitor in a food or drink, it is possible to provide a food or drink having a high palatability and a safe anti-cariogenic effect without excessively impairing the flavor of the food or drink.
  • FIG. 1 shows the 1 HNMR spectrum of compound 2.
  • FIG. 2 shows the 13 C NMR spectrum of compound 2.
  • FIG. 3 shows the 1 HNMR spectrum of compound 3.
  • FIG. 4 shows the 13 C NMR spectrum of compound 3.
  • FIG. 5 shows the 1 HNMR spectrum of Compound 1.
  • FIG. 6 shows the 13 C NMR spectrum of Compound 1.
  • FIG. 7 shows the evaluation results of the inhibitory action on glucosyltransferase B of each compound of EGCG dimer and trimer.
  • FIG. 8 shows the evaluation results of the inhibitory action on the glucosyltransferase C of each compound of EGCG dimer and trimer.
  • FIG. 9 shows the evaluation results of the inhibitory action on glucosyltransferase B of each compound of EGCG trimer and tetramer.
  • FIG. 10 shows the evaluation results of the inhibitory action on the glucosyltransferase C of each compound of EGCG trimer and tetramer.
  • EGCG Epicocacatechin-3-O-gallate
  • the active ingredient contained in the GTF inhibitor of the present invention is the EGCG polymer.
  • an EGCG polymer having a structure in which two or three EGCGs are bonded via the methylene group at the 6-position and / or 8-position of the chroman ring can be preferably used.
  • Specific examples of such EGCG polymers include the following formulas (I), (II), and (III):
  • the compound of formula (I) can be represented as EGCG8: 8EGCG6: 8EGCG based on the binding mode of EGCG (hereinafter referred to as oolong homobisflavan-trimer-1, OHBF-Tri-1, Or called Tri-1).
  • the compound of the formula (II) can be expressed as EGCG6: 8EGCG6: 8EGCG (hereinafter referred to as oolong homobisflavan-trimer-2, OHBF-Tri-2, or Tri-2). Called).
  • the compound of the formula (III) can be represented as EGCG8: 8EGCG6: 6EGCG (hereinafter referred to as oolong homobisflavan-trimer-4, OHBF-Tri-4, or Tri-4 in this specification). ).
  • the compound of formula (IV) can be expressed as EGCG6: 8EGCG.
  • the compound of formula (IV) is reported to be a compound contained in oolong tea and the like, and is known as oolong homobisflavan-B (OHBF-B).
  • the compounds of formulas (II) and (III) are novel compounds.
  • the above EGCG polymer can be produced by reacting epigallocatechin gallate with formaldehyde in a solvent in the presence of an acid.
  • Examples of the solvent that can be used for the reaction include alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, and isopropanol.
  • the amount of the solvent used is not particularly limited. For example, 20 to 200 parts by mass of the solvent can be used with respect to 1 part by mass of epigallocatechin gallate.
  • the acid for example, inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, and nitric acid, and organic acids such as formic acid and acetic acid can be used.
  • the amount of acid used is not particularly limited. For example, 0.01 to 2 mol of acid can be used per 1 mol of epigallocatechin gallate.
  • Formaldehyde can be used, for example, in an amount of 1 to 100 mol with respect to 1 mol of EGCG.
  • the reaction temperature and time may vary depending on the amount of solvent used, etc.
  • the reaction temperature is ⁇ 10 to 50 ° C.
  • the reaction time is 10 minutes to 12 hours.
  • the reaction temperature is room temperature (about 25 ° C.).
  • the product obtained by the reaction of EGCG and formaldehyde is usually a mixture containing at least two compounds of different compounds in which the chroman ring is linked by a methylene group.
  • known production methods such as open column chromatography using styrene-based adsorption resins such as HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), dextran-based resins such as Shephadex LH-20, and high-performance liquid chromatography (HPLC) are used. By using it, it is possible to isolate each compound of the formulas (I) to (IV) from such a mixture.
  • the EGCG polymer used in the glucosyltransferase inhibitor of the present invention may be in the form of a salt.
  • a salt is not particularly limited as long as it is a pharmaceutically or food acceptable salt, for example, a group of the periodic table such as lithium salt, sodium salt, potassium salt, calcium salt, and magnesium salt or Mention may be made of salts of Group 2 metal elements.
  • Such metal salts can be formed, for example, at the phenolic hydroxyl group of EGCG.
  • an EGCG trimer sodium salt is obtained by reacting an EGCG trimer with metallic sodium or sodium hydride in an aprotic solvent to convert a hydroxyl group (—OH) contained in the EGCG trimer to a sodium alkoxide group (— Can be produced by conversion to ONa).
  • a hydroxyl group —OH
  • a sodium alkoxide group — Can be produced by conversion to ONa.
  • all of the hydroxyl groups contained in the EGCG trimer can be converted to sodium alkoxide groups, and only part of the hydroxyl groups are converted to sodium alkoxide groups. It can also be converted.
  • the EGCG polymer which is an active ingredient of the GTF inhibitor of the present invention, is extracted and purified from teas using Camellia sinensis [A1] leaves, preferably fermented tea such as oolong tea and black tea, and roasted tea. It can also be isolated.
  • EGCG polymers in particular oolong homobisflavan-trimer-1, which is a compound of the above formula (I), oolong homobisflavan-trimer-2, which is a compound of the formula (II), It was found that oolong homobisflavan-trimer-4 which is a compound of) and oolong homobisflavan-B which is a compound of formula (IV) have a high glucosyltransferase inhibitory action.
  • the glucosyltransferase inhibitory action can be measured using any of the evaluation methods described in the prior art documents shown in the background art. For example, glucosyltransferase prepared from Streptococcus mutans or the like is added to an aqueous solution containing sucrose and incubated at a temperature similar to that in the oral cavity (about 37 ° C.) for less than 24 hours, preferably about 16 to 20 hours. Then, glucan is produced from sucrose by an enzymatic reaction. Since glucan is insoluble in water, the amount of glucan produced can be evaluated by measuring the turbidity (for example, turbidity at a wavelength of 550 nm) of the obtained reaction solution.
  • turbidity for example, turbidity at a wavelength of 550 nm
  • the glucosyltransferase inhibitor of the present invention can be used as an anti-cariogenic agent because it inhibits the activity of glucosyltransferase (GTF) to suppress the generation of glucan causing plaque in the mouth.
  • GTF glucosyltransferase
  • the glucosyltransferase inhibitor or anti-cariogenic agent of the present invention is derived from EGCG contained in foods and drinks that are eaten daily such as oolong tea, it has high palatability and high safety to the human body.
  • the glucosyltransferase inhibitor or anti-cariogenic agent of the present invention can be added to various foods and drinks for the purpose of anti-caries such as caries prevention.
  • foods and beverages to which the glucosyltransferase inhibitor or the anticaries agent of the present invention is added include soft drinks, tea drinks, liquid tonics, health drinks, nutritional drinks, sports drinks, carbonated drinks (concentrated concentrates of these drinks and Beverages (including preparation powder) and foods such as gums, candy, jelly, tablet confectionery, health foods, nutritional supplements, and supplements.
  • the amount added to the food or drink is not particularly limited as long as the desired effect is obtained, and can be appropriately determined by considering the taste, color, fragrance and the like of the food and drink.
  • the EGCG polymer when preparing a beverage intended for anti-caries, can be added to the beverage at a concentration of about 0.01 to 1000 ppm.
  • the EGCG polymer when added to a solid food, about 0.01 to 5000 ⁇ g / g of EGCG polymer can be added with respect to the weight of the solid food.
  • the glucosyltransferase inhibitor or anti-cariogenic agent of the present invention can suppress the production of glucan causing plaque in the mouth by inhibiting the activity of glucosyltransferase (GTF), prevention of dental caries and bad breath It can be used as an oral hygiene agent.
  • the oral hygiene agent in the present invention include dentifrice, mouthwash, troche and the like.
  • These oral hygiene agents can be produced by a conventional method using a carrier commonly used in the art.
  • the carrier various organic or inorganic carrier substances that are commonly used as pharmaceutical materials can be used.
  • formulation additives such as preservatives, antioxidants, colorants, sweeteners and the like can be blended as necessary.
  • the amount of the GTF inhibitor or anti-cariogenic agent of the present invention added to the oral hygiene agent can be appropriately determined according to the form of the oral hygiene agent, etc. For example, about 0.0001 to 10% by weight in the oral hygiene agent
  • the EGCG polymer can be contained so that the concentration becomes.
  • Preparative HPLC conditions The fraction obtained by CHP-20P column purification was further purified by reverse phase preparative HPLC. ⁇ Conditions> Column: Develosil ODS-HG-5 (5 cm ⁇ ⁇ 50 cm, Nomura Chemical Co., Ltd.) Mobile phase: A: 0.05% TFA / H 2 O, B: 90% CH 3 CN / 0.05% TFA / H 2 O Flow rate: 32 ml / min Gradient program: Isocratic at A80% / B20% (30 min), gradient from A80% / B20% to A60% / B40% (100 min), isocratic at A60% / B40% (20 min) Detection: A280nm Sample: fr. Obtained by CHP-20P column purification. 2 to fr. 7 were each dissolved in 20% CH 3 CN, and the whole amount was loaded in several portions.
  • One oolong homobisflavan-B (OHBF-B), compound 6 is a EGCG trimer with a binding mode of EGCG8: 8EGCG6: 8EGCG Oulon homobisflavan-trimer-1 (in this application, OHBF-Tri-1 Or Tri-1).
  • the bond described as 6: 8 or 8: 8 between the above EGCGs represents a state in which the 6th or 8th carbon of the A ring of EGCG is bridged with a methylene group interposed therebetween.
  • the structural formulas of the above compounds are shown below.
  • the compounds 1 to 3 were subjected to structural analysis by the following MS and NMR.
  • MS was measured in negative and V mode using ESI with a Z spray ion source attached to the ion source by Q-TOF Premier (manufactured by Micromass, UK).
  • Cone volt. 45 V
  • Capillary voltage 3 KV
  • Desolation Temp 180 ° C.
  • mass correction by rock spray was performed, and leucine enkephalin (m / z 554.2615 [MH] ⁇ ) was used as a reference.
  • Compound 1 gives a molecular ion of m / z 1867.3100 [M ⁇ H] ⁇ and a divalent 933.1151 [M ⁇ 2H] 2 ⁇ , and has a molecular formula of C 91 H 72 O 44 (err .: ⁇ 11. 7 ppm), and it was estimated that the EGCG4 molecule was crosslinked by three methylenes.
  • NMR was measured by dissolving Compound 2 in CD 3 OH and Compound 3 in DMSO-d6 ((CD 3 ) 2 SO).
  • Compound 2 has CD 3 OH protons and 13 C residual peaks of ⁇ 3.30 and ⁇ 48.97 as internal standards, and Compound 3 is DMSO-d6 1 H of 2.50 ppm and 13 C residual peak of ⁇ 39. .43 was used as an internal standard.
  • Measurement items were 1 HNMR, 13 CNMR, 1 H ⁇ 13 C ⁇ -HSQC, 1 H ⁇ 13 C ⁇ -HMBC, TOCSY, and DQF-COSY with DMX-750 spectrometer (BRUKER BIOSPIN, Germany).
  • compound 2 is a compound of the above formula (II) having a binding mode of EGCG6: 8EGCG6: 8EGCG (that is, oolong homobisflavan-trimer-2, also referred to as OHBF-Tri-2 or Tri-2 in the present application).
  • compound 3 is a compound of the above formula (III) having a binding mode of EGCG8: 8EGCG6: 6EGCG (ie, oolong homobisflavan-trimer-4, also referred to as OHBF-Tri-4 or Tri-4 in this application) ) Became clear.
  • 1 HNMR and 13 CNMR spectra of compounds 2 and 3 are shown in FIGS.
  • Compound 3 The 1 H NMR of oolong homobisflavan-trimer-4 (in DMSO-d6) is ⁇ 10.46, 9.18, 9.16, 9.16, 9.12, 9.06, 9.05, 8.90, 8.88, 8.84,8.72, 8.69, 8.69, 8.46, 8.34.
  • Compound 1 was dissolved in DMSO-d6, and NMR measurement was performed using 1 H and 13 C residual peaks ⁇ 2.50 and ⁇ 39.43 as internal standards. Measurement items were 1 HNMR, 13 CNMR, 1 H ⁇ 13 C ⁇ -HSQC, 1 H ⁇ 13 C ⁇ -HMBC, TOCSY, and DQF-COSY with DMX-750 spectrometer (BRUKER BIOSPIN, Germany).
  • compound 1 is an EGCG tetramer having a binding mode of EGCG8: 6EGCG8: 8EGCG6: 8EGCG (oolon homobisflavan-tetramer-2, also referred to as OHBF-Tet-2 or Tet-2 in this application). It became clear that.
  • the 1 HNMR and 13 CNMR spectra of Compound 1 are shown in FIGS.
  • Oolong homobisflavan-tetramer-2 has 1 HNMR (DMSO-d6) of ⁇ 9.91, 9.25, 9.16, 8.09, 7.22, 6.81, 6.76, 6.74, 6.52, 5.94, 5.50, 5.38, 4.77, 4.52, 3.95, 3.95, 3.80, 3.54, 2.80, 2.74, 2.73, 2.67 signals, 13 CNMR is ⁇ 165.08, 165.01, 154.06, 152.83, 152.35, 151.45, 150.78, 150.26, 145.52, 145.52, 145.24, 145.18, 138.49, 138.44, 132.21, 132.10, 128.42, 127.63, 119.05, 118.95, 108.58, 108.46, 108.46, 106.95, 105.74, 104.92, 104.06, 98.32, 97.81, 76.59, 75.94, 66.69, 66.
  • rGTF Recombinant Glucosyltransferase
  • rGTFB glucosyltransferase B
  • rGTFC recombinant glucosyltransferase C
  • RGTFB having a specific activity of 503 mU / mg protein was used, and rGTFC having a specific activity of 6.3 to 22.3 mU / mg protein was mixed and used.
  • activity 1U indicates enzyme activity when 1.0 mM sucrose-derived glucose is converted to glucan in 1 minute.
  • Protein quantification was performed using the bicinchoninic acid method (BCA method) (BCA protein assay kit, PIERCE).
  • OHBF-A inhibited the activity of GTFB, but on the contrary, it was found that GTFC slightly enhanced the activity. In addition, it was found that TSN-A hardly affects the activity of GTFB, and that GTFC significantly increases the activity.
  • OHBF-B and OHBF-Tri-1 were found to inhibit the activity of both GTFB and GTFC. In particular, OHBF-Tri-1 that is a trimer was found to most strongly inhibit the activities of both GTFB and GTFC compared to other compounds that are dimers.
  • EGCG tetramer Tet-2 slightly inhibited the activity of GTFC, but no significant inhibitory effect was observed on GTFB.
  • each of the EGCG trimers Tri-1, Tri-2, and Tri-4 has an inhibitory effect on GTFB and GTFC, and has a higher inhibitory activity on GTFB than Tet-2, which is an EGCG tetramer. It was.
  • Tri-1, Tri-2, and Tri-4 which are EGCG trimers, and OHBF-B, which is an EGCG dimer, have a high GTF inhibitory action.
  • the EGCG trimers Tri-1, Tri-2, and Tri-4 are the EGCG dimers OHBF-A, OHBF-B, and TSN-A, and the EGCG tetramer Tet. It was found to have a higher GTF inhibitory effect than -2.
  • LC-MS / MS Quantification of Polymerized Polyphenols Trimer and tetramer LC-MS / MS measurement conditions and Suntory Black Oolong Tea LC-MS / MS measurement of EGCG polymer is 4000 Q TRAP (Applied) The measurement was performed under the following conditions using a turbo ion spray. Collision energy: 46 eV (nega.), Ionspray voltage: 4500 V, Temp: 450 ° C.
  • the measurement channel in MRM (multiple reaction monitoring) of each compound is 698.40 / 168.90 (negative. Divalent) for oolong homobisflavan-trimers, and oolong homobisflavan-trimer-1 is used as a standard substance.
  • Oolong homobisflavan-tetramer-2 was 933.16 / 168.90 (negative. Divalent), and oolong homobisflavan-tetramer-2 was used as a standard substance. The measurement was performed under the following measurement conditions.
  • black oolong tea (before sterilization) was fractionated stepwise with a CHP-20P column (Mitsubishi Chemical Corporation), and after quantifying each fraction, the concentrations detected in each fraction were added together to determine the concentration in the tea. Concentration.
  • the concentration in the black oolong tea was 172 ng / ml, which was the sum of the five components detected by trimmers in terms of oolong homobisflavan-trimer-1. Tetramers were the total of the four detected components, and were 55 ng / ml in terms of oolong homobisflavan-tetramer-2.

Abstract

　嗜好性が高く、安全性も高いグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤を提供する。エピガロカテキンガレートの重合体またはその塩を有するグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤。特に、クロマン環の６位および／または８位でメチレン基を介して結合した化合物であるエピガロカテキンガレート重合体を含む上記剤。

Description

エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤
　本発明は、エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤、およびこれを添加した飲食品に関する。
　う蝕の原因については過去に種々の仮説が提唱されたが、現在ではミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）の化学細菌説に基づく細菌感染症の一種であると認められている。この説によれば、う蝕の発生機構は以下の通りである。即ち、口腔連鎖球菌、特にストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus mutans、以下「Ｓ・ミュータンス」と略称する。）が産生するグルコシルトランスフェラーゼ（糖転移酵素、ＧＴＦ）が、口中のショ糖を基質として、粘着性で不溶性の多糖（グルカン）を生成する。Ｓ・ミュータンスの菌体は、生成したグルカンによって、歯表面に付着して菌塊（プラーク）を形成する。プラーク中では、Ｓ・ミュータンスを始め種々の微生物が共生・繁殖しているが、これら微生物の代謝によって有機酸が産生され、この有機酸の作用でプラーク内部のｐＨが低下し、歯のエナメル質表面に脱灰が生じてう蝕が発生し、進行する。また、歯垢形成は、う蝕のほかに、歯周病や口臭の原因となるとされている。
　このようにＳ・ミュータンスを中心とする口腔連鎖球菌によって形成される歯垢がう蝕の原因となっていることから、歯垢形成を抑えることが、ひいてはう蝕の発生を予防する有効な手段となりうる。
　近年、抗う蝕作用を有する物質として、植物などに含まれるカテキン類が注目されている。特許文献１には、フラボノイド（カテキン類の一種）をペルオキシダーゼで処理することにより製造される８００～５０００の分子量を有するフラボノイド重合物は、処理前に比べて、グルコシルトランスフェラーゼの阻害作用が増強されることが報告されている。
　また、非特許文献１には、フラボノイド重合物が、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Streptococcus sobrinus）由来のグルコシルトランスフェラーゼの活性を、２．５μｇ／ｍＬで５０％阻害することが報告されている。
　また、特許文献２には、フラバノン類／フラバノール類の還元物あるいはロイコシアニジン類をカテキン類と縮合させることにより製造される重量分子量が１０００～１００００のフラボノイド重合物に、グルコシルトランスフェラーゼの阻害作用がみられることが報告されている。
　しかし、これらのフラボノイド重合物は、フラボノイドの３～５量体の混合物または２～３量体の混合物であって、混合物中に含まれる種々の化合物の単離は行なわれておらず、したがって化合物単体の各々に関してのグルコシルトランスフェラーゼ阻害活性に関しては明らかにされていない。
　日常飲食する茶の中では、非発酵茶である緑茶に由来するカテキン類の混合物にグルコシルトランスフェラーゼ阻害作用がみられることが報告されている（非特許文献２）。しかし、ラットを用いた試験では、充分な抗う蝕作用が得られなかったことも報告されている。
　また、半発酵茶であるウーロン茶やその精製品に、グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性がみられることが報告されている（特許文献３、非特許文献３、非特許文献４、および非特許文献５）。また、緑茶や烏龍茶、紅茶を加熱処理することでグルコシルトランスフェラーゼ阻害活性が増強されることや（特許文献４）、カテキン類を加熱処理することでグルコシルトランスフェラーゼ阻害活性が増強されることが知られている（特許文献５）。
　しかし、いずれの場合にも、茶由来の混合物のうち、どの化合物に活性があるのかについては明らかにされていない。
特開平６－２４７９５９号公報 特開平７－２４２５５６号公報 特開平６－２７９３０２号公報 特開平３－２８４６２５号公報 特開平３－２８４６７１号公報
FEMS Microbiology Letters 143 (1996) 35-40, Hamada S. et al. Caries Res. 25 (1991) 438-443, Otake S. et al. Applied and Environmental Microbiology, 59, No.4  (1993) 968-973, Nakahara K. et al. The Nippon Dental review No.622 (August 1994) 179-189, Ooshima T. and Hamada S. FEMS Microbiology Letters 228 (2003) 73-80, , Matsumoto M. et al.
　上記のとおり、グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性を有する植物抽出物等に関する報告はなされているが、いずれの場合にも、植物抽出物由来の混合物に活性がみられることが報告されるのみであって、具体的な活性成分（化合物）は明らかとされておらず、活性成分の同定が望まれていた。また、嗜好性の低い植物由来の成分を飲食品に利用すると、飲食品の香味および安全性を害することが予想されるので、嗜好性の高い植物由来の活性成分を探索することが望まれていた。
　本発明者らは、飲食物として利用することを考慮し、日常飲用されている茶に含まれる成分に着目し鋭意検討したところ、ウーロン茶などに含まれるカテキン類の一種である（－）－エピガロカテキン－３－Ｏ－ガレート（以下、ＥＧＣＧともよぶ）を重合して得られたＥＧＣＧ重合体に、中でも、特にＥＧＣＧ３量体に強いグルコシルトランスフェラーゼ阻害活性がみられることを見出し、本発明に至った。
　すなわち、本発明は以下のとおりである。
１．　エピガロカテキンガレート３量体またはその塩を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
２．　前記エピガロカテキンガレート３量体が、クロマン環の６位および／または８位でメチレン基を介して結合した化合物である、上記１に記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
３．　前記エピガロカテキンガレート３量体が、次式（Ｉ）：
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-1
を有する化合物、次式（ＩＩ）：
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-2
を有する化合物、および次式（ＩＩＩ）：
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-3
を有する化合物
（式（Ｉ）～（ＩＩＩ）中、Ｒは次式（Ａ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 で表されるガロイル基である）
からなる群から選択される化合物である、上記２に記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
４．　次式（ＩＶ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 で表される化合物を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
５．　エピガロカテキンガレート３量体またはその塩を有効成分とする抗う蝕剤。
６．　前記エピガロカテキンガレート３量体が、クロマン環の６位および／または８位でメチレン基を介して結合した化合物である、上記５に記載の抗う蝕剤。
７．　前記エピガロカテキンガレート３量体が、前記式（Ｉ）を有する化合物、前記式（ＩＩ）を有する化合物、および前記式（ＩＩＩ）を有する化合物（式（Ｉ）～（ＩＩＩ）中、Ｒは前記式（Ａ）で表されるガロイル基である）からなる群から選択される化合物である、上記６に記載の抗う蝕剤。
８．　前記式（ＩＶ）で表される化合物を有効成分とする抗う蝕剤。
９．　上記１～８のいずれかに記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤を添加した飲食品。
１０．　前記飲食品が茶飲料である、上記９に記載の飲食品。
１１．　上記１～８のいずれかに記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤を添加した口腔衛生剤。
　本発明者らにより、（－）－エピガロカテキン－３－Ｏ－ガレート（ＥＧＣＧ）重合体、特に特定のＥＧＣＧ２量体および３量体に、高いグルコシルトランスフェラーゼ阻害作用がみられることが見出された。上記のとおり、グルコシルトランスフェラーゼ（以下、ＧＴＦともいう）は口中で歯垢の原因となるグルカンを生成するので、ＧＴＦの活性を阻害することにより、う蝕を予防することができる。したがって、本発明のＧＴＦ阻害剤は、抗う蝕剤として用いることができる。また、本発明のＧＴＦ阻害剤は、歯垢の原因となるグルカンの生成を抑えるので、口臭を抑える効果も期待できる。さらに、本発明のＧＴＦ阻害剤は、ウーロン茶などの日常飲食する飲食品に含まれるＥＧＣＧに由来するため、嗜好性が高く、人体に対して高い安全性を有する。また、このＧＴＦ阻害剤を飲食品に一定量含有させることにより、飲食品の香味を過度に損なうことなく、嗜好性の高い、安全な、抗う蝕作用を有する飲食品を提供することができる。
図１は、化合物２の1ＨＮＭＲスペクトルを示す。 図２は、化合物２の13ＣＮＭＲスペクトルを示す。 図３は、化合物３の1ＨＮＭＲスペクトルを示す。 図４は、化合物３の13ＣＮＭＲスペクトルを示す。 図５は、化合物１の1ＨＮＭＲスペクトルを示す。 図６は、化合物１の13ＣＮＭＲスペクトルを示す。 図７は、ＥＧＣＧ２量体および３量体の各化合物のグルコシルトランスフェラーゼＢに対する阻害作用の評価結果を示す。 図８は、ＥＧＣＧ２量体および３量体の各化合物のグルコシルトランスフェラーゼＣに対する阻害作用の評価結果を示す。 図９は、ＥＧＣＧ３量体および４量体の各化合物のグルコシルトランスフェラーゼＢに対する阻害作用の評価結果を示す。 図１０は、ＥＧＣＧ３量体および４量体の各化合物のグルコシルトランスフェラーゼＣに対する阻害作用の評価結果を示す。
　＜エピガロカテキンガレート重合体＞
　（－）－エピカロカテキン－３－Ｏ－ガレート（ＥＧＣＧ）は、緑茶などの茶に含まれるカテキン類のうちの主要な成分の１つであり、次の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 により表される構造を有する化合物である。
　本発明のＧＴＦ阻害剤に含まれる有効成分は、上記ＥＧＣＧの重合体である。本発明には、特に、ＥＧＣＧがそのクロマン環の６位および／または８位でメチレン基を介して２または３個結合した構造を有するＥＧＣＧ重合体を好ましく用いることができる。そのようなＥＧＣＧ重合体の具体例としては、次の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、および式（ＩＩＩ）：
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-7
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-8
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-9
により表されるＥＧＣＧ３量体（式（Ｉ）～（ＩＩＩ）中、Ｒはガロイル基である）、および次式（ＩＶ）：
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-10
で表されるＥＧＣＧ２量体などが挙げられる。
　式（Ｉ）の化合物は、ＥＧＣＧの結合様式に基づいて、ＥＧＣＧ８：８ＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧと表記することができる（以下、本明細書では、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－１、ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－１、またはＴｒｉ－１とよぶ）。同様に、式（ＩＩ）の化合物は、ＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧと表記することができる（以下、本明細書では、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－２、ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－２、またはＴｒｉ－２とよぶ）。また、式（ＩＩＩ）の化合物は、ＥＧＣＧ８：８ＥＧＣＧ６：６ＥＧＣＧと表記することができる（以下、本明細書では、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－４、ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－４、またはＴｒｉ－４とよぶ）。式（ＩＶ）の化合物は、ＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧと表記することができる。式（ＩＶ）の化合物はウーロン茶などに含まれる化合物であることが報告されており、ウーロンホモビスフラバン－Ｂ（ＯＨＢＦ－Ｂ）として知られている。なお、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、新規化合物である。
　上記のＥＧＣＧ重合体は、エピガロカテキンガレートを、溶媒中、酸の存在下でホルムアルデヒドと反応させることによって製造することができる。
　反応に使用することができる溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、およびイソプロパノール等のアルコール類が挙げられる。溶媒の使用量については特に制限はないが、例えば、１質量部のエピガロカテキンガレートに対して２０～２００質量部の溶媒を用いることができる。
　酸としては、例えば、塩酸、硫酸、および硝酸等の無機酸、ならびに、蟻酸および酢酸等の有機酸などを用いることができる。酸の使用量については特に制限はないが、例えば、１モルのエピガロカテキンガレートに対して、０．０１～２モルの酸を用いることができる。
　ホルムアルデヒドは、例えば、１モルのＥＧＣＧに対して、１～１００モルで用いることができる。
　反応の温度および時間は、用いる溶媒量等によって変わりうるが、例えば、反応温度は、－１０～５０℃、反応時間は１０分～１２時間である。典型的には、反応温度は室温（２５℃程度）である。
　ＥＧＣＧとホルムアルデヒドとの反応によって得られる生成物は、通例、メチレン基によるクロマン環の連結様式が異なる化合物の少なくとも二種の化合物を含有する混合物である。例えば、ＨＰ－２０（三菱化学株式会社製）などのスチレン系吸着樹脂や、ＳｈｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０のようなデキストラン系樹脂によるオープンカラムクロマトグラフィー、ならびに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などの公知の生成方法を用いることにより、このような混合物から、式（Ｉ）～（ＩＶ）の各化合物を単離することができる。
　なお、式（Ｉ）の化合物（ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－１）の調製方法は、特許文献（ＷＯ２００５／１１６００５）に、「三量体（４）」の合成および精製方法として、記載されている。また、式（ＩＶ）の化合物（ＯＨＢＦ－Ｂ）の調製方法は、文献（Chem.Pharm.Bull 37(12), 3255-3563(1989)）に記載されている。
　本発明のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤に用いられるＥＧＣＧ重合体は、塩の形態であってもよい。そのような塩としては、医薬的にまたは食品として許容可能な塩であれば特に制限されず、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩などの周期表の１族または２族の金属元素の塩を挙げることができる。このような金属塩は、例えば、ＥＧＣＧのフェノール性水酸基において形成することができる。
　例えば、ＥＧＣＧ３量体のナトリウム塩は、ＥＧＣＧ３量体と金属ナトリウムまたは水素化ナトリウムとを、非プロトン性溶媒中で反応させて、ＥＧＣＧ３量体に含まれる水酸基（－ＯＨ）をナトリウムアルコキシド基（－ＯＮａ）に変換することによって製造することができる。この際、金属ナトリウムまたは水素化ナトリウムの使用量を調節することで、ＥＧＣＧ３量体に含まれる水酸基のすべてをナトリウムアルコキシド基に変換することができ、また、水酸基の一部のみをナトリウムアルコキシド基に変換することもできる。
　これらのＥＧＣＧ重合体は合成によって得ることもできるが、実施例５に後述する通り、烏龍茶中にも存在することが判明した。そのため、本発明のＧＴＦ阻害剤の有効成分であるＥＧＣＧ重合体は、Camellia sinensis [A1]の葉を原料とする茶類、好ましくは烏龍茶、紅茶等の発酵茶や焙じ茶から抽出および精製することによって、単離することもできる。
　＜ＥＧＣＧ重合体を有効成分とするＧＴＦ阻害剤または抗う蝕剤＞
　本発明者らにより、ＥＧＣＧ重合体、特に上記の式（Ｉ）の化合物であるウーロンホモビスフラバン－トリマー－１、式（ＩＩ）の化合物であるウーロンホモビスフラバン－トリマー－２、式（ＩＩＩ）の化合物であるウーロンホモビスフラバン－トリマー－４、および式（ＩＶ）の化合物であるウーロンホモビスフラバン－Ｂに高いグルコシルトランスフェラーゼ阻害作用がみられることが見出された。
　グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用の測定は、背景技術に示した先行文献等に記載されるいずれの評価法を用いても行なうことができる。例えば、Streptococcus mutansなどから調製したグルコシルトランスフェラーゼを、ショ糖を含む水溶液中に添加し、口腔内と同程度の温度（約３７℃）で、２４時間未満、好ましくは１６～２０時間程度インキュベートして、酵素反応によりショ糖からグルカンを生成させる。グルカンは水に不溶であるため、得られた反応液の濁度（例えば波長５５０ｎｍにおける濁度）を測定することにより、グルカンの生成量を評価することができる。グルカンの生成量が少ない（すなわち、濁度が低い）場合は、グルカンの生成量が多い（すなわち、濁度が高い）場合に比べて、グルコシルトランスフェラーゼの活性がより阻害されているといえる。
　本発明のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤は、グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）の活性を阻害することにより、口中で歯垢の原因となるグルカンの生成を抑えることができるから、抗う蝕剤として用いることができる。
　本発明のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤は、ウーロン茶などの日常飲食する飲食品に含まれるＥＧＣＧに由来するため、嗜好性が高く、人体に対して高い安全性を有する。
　＜飲食品＞
　本発明のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤は、虫歯予防などの抗う蝕を目的として、各種飲食品に添加することができる。本発明のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤を添加する飲食品の例としては、清涼飲料、茶飲料、液状強壮剤、健康飲料、栄養補給飲料、スポーツドリンク、炭酸飲料（これら飲料の濃縮原液および調製用粉末を含む）などの飲料や、ガム、キャンディー、ゼリー、錠菓、健康食品、栄養補給食品、サプリメントなどの食品が揚げられる。
　飲食品への添加量は、所望の効果が得られる範囲であれば特に限定されず、飲食品の味、色、香りなどの点を考慮することにより適宜決定できる。例えば、抗う蝕を目的とした飲料を調製する場合、飲料中に０．０１～１０００ｐｐｍ程度の濃度でＥＧＣＧ重合体を添加することができる。また、ＥＧＣＧ重合体を固形の食品に添加する場合、固形食品の重量に対して、０．０１～５０００μｇ／ｇ程度のＥＧＣＧ重合体を添加することができる。
　＜口腔衛生剤＞
　本発明のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤は、グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）の活性を阻害することにより、口中で歯垢の原因となるグルカンの生成を抑えることができるため、虫歯予防および口臭予防などの口腔衛生剤に用いることができる。本発明における口腔衛生剤の例としては、歯磨、洗口液、トローチなどが挙げられる。これらの口腔衛生剤は、当業界で慣用される担体を用いて、慣用の手法で製造することができる。担体の例としては、製剤素材として慣用の各種有機または無機担体物質を用いることができる。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色料、甘味剤などの製剤添加物を配合することもできる。本発明のＧＴＦ阻害剤または抗う蝕剤の口腔衛生剤への添加量は、口腔衛生剤の形態などに応じて適宜決定できるが、例えば、口腔衛生剤中に、０．０００１～１０重量％程度の濃度となるように、ＥＧＣＧ重合体を含有させることができる。
　本発明を以下の実施例によってさらに詳しく説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
　ＥＧＣＧ重合体の合成および精製
　ア．合成とオープンカラムによる分画：
　６ｇの（－）－エピガロカテキン－３－Ｏ－ガレート（ＥＧＣＧ）（ロッシュ社、Ｔｅａｖｉｇｏ（登録商標））を０．０２Ｎ　ＨＣｌを含む１２０ｍｌのエタノールに溶解し、４％ホルムアルデヒドのエタノール溶液１８０ｍｌを加え、室温で４時間、撹拌した。反応終了後、純水で１０倍に希釈し、吸着樹脂ＣＨＰ－２０Ｐカラム（６００ｍｌ、３７－７５μｍ、三菱化学株式会社）に負荷した。１２００ｍｌの水で洗浄後、９００ｍｌの２５％ＣＨ3ＣＮ、１２００ｍｌの３０％ＣＨ3ＣＮで順次溶出し、２５％ＣＨ3ＣＮ溶出画分は３００ｍｌずつ３フラクション（ｆｒ．１からｆｒ．３）に分け、３０％ＣＨ3ＣＮ溶出画分は３００ｍｌずつ４フラクション（ｆｒ．４からｆｒ．７）に分画した。
　イ．分取ＨＰＬＣ条件：
　ＣＨＰ－２０Ｐカラム精製で得られた分画物をさらに逆相の分取ＨＰＬＣで精製した。
＜条件＞　
カラム：　Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ　ＯＤＳ－ＨＧ－５（５ｃｍφｘ５０ｃｍ、野村化学株式会社）

移動相：Ａ：０．０５％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ、Ｂ：９０％ＣＨ3ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ
流速：３２ｍｌ／ｍｉｎ

グラジエントプログラム：Ａ８０％／Ｂ２０％でアイソクラティック（３０ｍｉｎ）、Ａ８０％／Ｂ２０％からＡ６０％／Ｂ４０％へグラジエント（１００ｍｉｎ）、Ａ６０％／Ｂ４０％でアイソクラティック（２０ｍｉｎ）

検出：Ａ２８０ｎｍ
サンプル：ＣＨＰ－２０Ｐカラム精製で得られたｆｒ．２からｆｒ．７を、それぞれ２０％ＣＨ3ＣＮに溶解し、数回に分けて全量を負荷した。
　上記の分取条件おいて、保持時間１１３分（化合物１）、１２０分（化合物２）、１３０分（化合物３）、および保持時間８５分（化合物４）、保持時間１０６分（化合物５）、保持時間１０４分（化合物６）に相当する各ピークを集めた。
　ウ．化合物の構造解析：
　分取ＨＰＬＣで単離した化合物について、ＭＳおよびＮＭＲ測定を行った。このうち、化合物４～６のＭＳをＱ－ＴＯＦ　Ｐｒｅｍｉｅｒ（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社製、ＵＫ）により、ネガティブ、Ｖモード測定したところ、それぞれｍ／ｚ９２７．１６０、９２７．１６３、１３９７．２４８の［Ｍ－Ｈ］-のイオンピークが認められた。また、化合物４のＮＭＲスペクトルデータは文献（Ｃｈｅｍ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ　３７（１２），　３２５５－３５６３（１９８９））に記載のウーロンホモビスフラバン－ＡのＮＭＲスペクトルデータと一致した。化合物５のＮＭＲスペクトルデータは文献（Ｃｈｅｍ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ　３７（１２），　３２５５－３５６３（１９８９））に記載のウーロンホモビスフラバン－ＢのＮＭＲスペクトルデータと一致した。さらに、化合物６のＮＭＲスペクトルデータから、化合物６は、上記の式（Ｉ）の化合物、すなわち、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－１であることがわかった。これらの結果から、化合物４はＥＧＣＧ８：８ＥＧＣＧの結合様式を有するＥＧＣＧ２量体であるウーロンホモビスフラバン－Ａ（ＯＨＢＦ－Ａ）であり、化合物５はＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧの結合様式を有するＥＧＣＧ２量体であるウーロンホモビスフラバン－Ｂ（ＯＨＢＦ－Ｂ）であり、化合物６はＥＧＣＧ８：８ＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧの結合様式を有するＥＧＣＧ３量体であるウーロンホモビスフラバン－トリマー－１（本願では、ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－１またはＴｒｉ－１ともよぶ）であることが確認された。なお、上記のＥＧＣＧ間の６：８または８：８と記した結合はＥＧＣＧのＡ環の６位または８位の炭素が間にメチレン基を挟んで架橋した状態を表す。上記の各化合物の構造式を以下に示す。
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-11
[規則26に基づく補充 14.10.2009]　
Figure WO-DOC-CHEMICAL-12
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 　化合物１から化合物３については、以下のＭＳ、ＮＭＲにより構造解析を行った。ＭＳはＱ－ＴＯＦ　Ｐｒｅｍｉｅｒ　（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社製、ＵＫ）でイオン源にＺスプレーイオンソースをつけたＥＳＩを用い、ネガティブ、Ｖモードで測定した。Ｃｏｎｅ　ｖｏｌｔ．：４５Ｖ、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｖｏｌｔａｇｅ：３ＫＶ、Ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ　Ｔｅｍｐ：１８０℃、ロックスプレーによる質量補正を行い、リファレンスにはロイシンエンケファリン（ｍ／ｚ５５４．２６１５［Ｍ－Ｈ］-）を用いた。
　その結果、化合物２はｍ／ｚ１３９７．２４７９［Ｍ－Ｈ］-の分子イオンを与え、分子式Ｃ68Ｈ54Ｏ33（ｅｒｒ．：０．７ｐｐｍ）、化合物３はｍ／ｚ１３９７．２５０９［Ｍ－Ｈ］-の分子イオンを与え、分子式Ｃ68Ｈ54Ｏ33（ｅｒｒ．：２．９ｐｐｍ）と算出され、ＥＧＣＧ３分子が２つのメチレンにより架橋された物質であると推定された。また、化合物１はｍ／ｚ１８６７．３１００［Ｍ－Ｈ］-の分子イオンおよび２価の９３３．１１５１［Ｍ－２Ｈ］2-を与え、分子式Ｃ91Ｈ72Ｏ44（ｅｒｒ．：－１１．７ｐｐｍ）と算出され、ＥＧＣＧ４分子が３つのメチレンにより架橋された物質であると推定された。　
　ＮＭＲは、化合物２についてはＣＤ3ＯＨに溶解し、化合物３についてはＤＭＳＯ－ｄ６（（ＣＤ3）2ＳＯ）に溶解して測定を行った。化合物２は、ＣＤ3ＯＨのプロトンと13Ｃの残存ピークであるδ３．３０およびδ４８．９７を内部標準とし、化合物３は、ＤＭＳＯ－ｄ６の1Ｈの２．５０ｐｐｍと13Ｃの残存ピークδ３９．４３を内部標準とした。測定項目は1ＨＮＭＲ、13ＣＮＭＲ、1Ｈ｛13Ｃ｝－ＨＳＱＣ、1Ｈ｛13Ｃ｝－ＨＭＢＣ、ＴＯＣＳＹおよびＤＱＦ－ＣＯＳＹをＤＭＸ－７５０ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（ＢＲＵＫＥＲ　ＢＩＯＳＰＩＮ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で測定した。ＮＭＲの結果、化合物２はＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧの結合様式を有する上記式（ＩＩ）の化合物（すなわち、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－２、本願では、ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－２またはＴｒｉ－２ともよぶ）であり、化合物３はＥＧＣＧ８：８ＥＧＣＧ６：６ＥＧＣＧの結合様式を有する上記式（ＩＩＩ）の化合物（すなわち、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－４、本願では、ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－４またはＴｒｉ－４ともよぶ）であることが明らかとなった。化合物２および３の1ＨＮＭＲ、13ＣＮＭＲスペクトルを図１～４に示す。
　化合物２：
ウーロンホモビスフラバン－トリマー－２（ＣＤ3ＯＨ中）の1ＨＮＭＲは、δ6.95, 6.92, 6.90, 6.60, 6.54, 6.44, 6.08, 6.02, 5.57, 5.55, 5.49, 5.18, 5.12, 4.91, 3.86, 3.83, 3.81, 3.76, 3.03, 3.01, 2.94, 2.89, 2.89, 2.82のシグナル、13ＣＮＭＲは、δ 167.72, 167.46, 167.37, 156.29, 155.25, 155.08, 154.79, 154.43, 153.64, 152.91, 151.64, 151.20, 147.00, 146.93, 146.38, 146.38, 146.34, 146.29, 140.03, 139.89, 139.89, 134.65, 134.48, 133.85, 130.64, 129.29, 129.10, 121.33, 121.14, 121.14, 110.31, 110.24, 110.24, 109.19, 108.07, 107.42, 107.05, 107.02, 106.79, 106.10, 101.59, 101.00, 100.45, 97.23, 96.71, 80.07, 79.94, 78.45, 70.00, 69.32, 69.28, 27.21, 27.21, 26.81, 17.91, 17.91のシグナルが認められた。
　化合物３：
ウーロンホモビスフラバン－トリマー－４（ＤＭＳＯ－ｄ６中）の1ＨＮＭＲは、δ10.46, 9.18, 9.16, 9.16, 9.12, 9.06, 9.05, 8.90, 8.88, 8.84,8.72, 8.69, 8.69, 8.46, 8.34, 8.05, 8.02, 8.00, 6.81, 6.78, 6.78, 6.52, 6.47, 6.35, 6.03, 5.93, 5.48, 5.46, 5.39, 5.04, 4.95, 4.89, 4.05, 3.95, 3.56, 3.56, 3.06, 3.00, 2.98, 2.76, 2.71, 2.67のシグナル、13ＣＮＭＲは、δ165.11, 165.09, 164.99, 157.66, 154.29, 153.82, 153.48, 153.07, 152.68, 152.23, 152.18, 150.88, 145.56, 145.52, 145.50, 145.26, 145.24, 145.23, 138.43, 138.43, 138.39, 132.34, 132.23, 132.19, 128.34, 128.34, 128.23, 119.17, 119.12, 119.04, 110.35, 110.31, 110.29, 109.19, 108.59, 108.56, 108.51, 106.97, 106.63, 105.26, 105.26, 105.13, 104.73, 101.28, 99.44, 99.41, 98.21, 97.34, 97.15, 96.03, 79.48, 79.07, 78.47, 69.95, 69.39, 69.28, 27.18, 26.98, 26.58, 18.16, 17.13のシグナルが認められた。
　また、化合物１はＤＭＳＯ－ｄ６に溶解し、1Ｈと13Ｃの残存ピークδ２．５０、δ３９．４３を内部標準としてＮＭＲ測定を行った。測定項目は1ＨＮＭＲ、13ＣＮＭＲ、1Ｈ｛13Ｃ｝－ＨＳＱＣ、1Ｈ｛13Ｃ｝－ＨＭＢＣ、ＴＯＣＳＹおよびＤＱＦ－ＣＯＳＹをＤＭＸ－７５０ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（ＢＲＵＫＥＲ　ＢＩＯＳＰＩＮ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で測定した。ＮＭＲの結果、化合物１はＥＧＣＧ８：６ＥＧＣＧ８：８ＥＧＣＧ６：８ＥＧＣＧの結合様式を有するＥＧＣＧ４量体である化合物（ウーロンホモビスフラバン－テトラマー－２、本願では、ＯＨＢＦ－Ｔｅｔ－２またはＴｅｔ－２ともよぶ）であることが明らかになった。化合物１の1ＨＮＭＲ、13ＣＮＭＲスペクトルを図５および図６に示す。
　化合物１：
ウーロンホモビスフラバン－テトラマー－２は1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）は、δ9.91, 9.25, 9.16, 8.09, 7.22, 6.81, 6.76, 6.74, 6.52,  5.94, 5.50, 5.38, 4.77, 4.52, 3.95, 3.95, 3.80, 3.54, 2.80, 2.74, 2.73, 2.67のシグナル、13ＣＮＭＲは、δ165.08, 165.01, 154.06, 152.83, 152.35, 151.45, 150.78, 150.26, 145.52, 145.52, 145.24, 145.18, 138.49, 138.44, 132.21, 132.10, 128.42, 127.63, 119.05, 118.95, 108.58, 108.46, 108.46, 106.95, 105.74, 104.92, 104.06, 98.32, 97.81, 76.59, 75.94, 66.69, 66.35,26.33, 25.26, 16.72, 15.99のシグナルが認められた。
　上記の通り同定された各化合物の構造式を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 　以上の合成および精製手順により得られた各化合物の収量は、ウーロンホモビスフラバン－Ａ（９８４ｍｇ）、ウーロンホモビスフラバン－Ｂ（３７４ｍｇ）、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－１（４６８ｍｇ）、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－２（７３ｍｇ）、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－４（１２ｍｇ）、およびウーロンホモビスフラバン－テトラマー－２（４４ｍｇ）であった。
　リコンビナントグルコシルトランスフェラーゼ（ｒＧＴＦ）の調製
　ｒＧＴＦを、論文M.matsumoto et al, FEMS Microbiology Letters 228 (2003) 73-80に記載の方法に準じて調製した。すなわち、Streptococcus mutansのグルコシルトランスフェラーゼＢ（ＧＴＦＢ）をコードする遺伝子を含むプラスミドｐＳＫ６を保有するEscherichia coli XL-2株を、アンピシリン１００μｇ／ｍＬおよびテトラサイクリン７．５μｇ／ｍＬ含有Ｌｕｒｉａ Ｂｅｒｔａｎｉ液体培地中で３７℃で１６時間振盪培養した。培地を遠心分離して菌体を集め、菌体を冷却した１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）に懸濁した後、超音波発生機（ＵＤ２０１型、トミー精工、東京）で氷冷下で菌体を破砕した。破砕後、１２，０００ｘ ｇで３０分間遠心分離することにより沈査を取り除いた。得られた上清をリコンビナントグルコシルトランスフェラーゼＢ（ｒＧＴＦＢ）として後の実験に用いた。
　同様に、Streptococcus mutansのグルコシルトランスフェラーゼＣ（ＧＴＦＣ）をコードする遺伝子を含むプラスミドｐＳＫ６を保有するEscherichia coli XL-2株を用いて、リコンビナントグルコシルトランスフェラーゼＣ（ｒＧＴＦＣ）を調製し、後の実験に用いた。
　ｒＧＴＦＢは比活性が５０３ｍＵ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎのものを用い、ｒＧＴＦＣは比活性が６．３～２２．３ｍＵ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎのものを混合して用いた。ここで、活性１Ｕは、１分間に、スクロース由来のグルコース１．０ｍＭをグルカンへと転換した際の酵素活性を示す。タンパク質の定量は、ビシンコニン酸法（ＢＣＡ法）（ＢＣＡプロテインアッセイキット、ＰＩＥＲＣＥ社）を用いて行なった。
　グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用の評価（１）
　実施例１により得られたウーロンホモビスフラバンＡ（ＯＨＢＦ－Ａ）、ウーロンホモビスフラバンＢ（ＯＨＢＦ－Ｂ）、およびウーロンホモビスフラバン－トリマー－１（Ｔｒｉ－１）、ならびに論文（Hashimoto, F. Nonaka, G. Nishioka, I. Chem. Pharm. Bull. 36 (5), 1676-1684 (1988)）に準じて調製したテアシネンシンＡ（ＴＳＮ－Ａ）の各々についてのグルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）阻害作用を、以下の手順により評価した。なお、ここで比較として用いたテアシネンシンＡ（ＴＳＮ－Ａ）は、ＥＧＣＧのＢ環の２’位同士が対称的に結合した物質であり、以下の構造を有する：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 　１％スクロース含有０．１％デキストランＴ１０を含む０．１Ｍ ＫＰＢ（ｐＨ６．０）２ｍＬに、実施例２により得られたｒＧＴＦＢまたはｒＧＴＦＣ（１５ｍＵ相当量（平均値））と、上記の各サンプル（０．１ｍｇ／ｍＬ、最終濃度）を混和し、３７℃で一晩インキュベートした。得られた反応液の濁度（５５０ｎｍ）を測定することにより、非水溶性グルカンの生成量を測定した。非水溶性グルカンの生成量がより少ない（すなわち、濁度がより低い）ことは、グルコシルトランスフェラーゼの活性がより阻害されたことを示す。結果を図７および図８に示す。なお、図中のコントロール（ｃｏｎｔ）は、上記サンプルを混和しない場合の濁度を示す。
　図７および８に示されるとおり、ＯＨＢＦ－Ａは、ＧＴＦＢの活性を阻害したものの、ＧＴＦＣについては、逆に、活性をやや強めることがわかった。また、ＴＳＮ－Ａは、ＧＴＦＢの活性にほとんど影響を及ぼさず、ＧＴＦＣについては、逆に、活性を非常に強めることがわかった。一方、ＯＨＢＦ－ＢおよびＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－１は、ＧＴＦＢとＧＴＦＣの両方について、活性を阻害することがわかった。特に、３量体であるＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－１は、２量体である他の化合物に比べて、ＧＴＦＢおよびＧＴＦＣの両者の活性を最も強く阻害することがわかった。
　グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用の評価（２）
　実施例１により得られたウーロンホモビスフラバン－トリマー－１（ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－１）、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－２（ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－２）、ウーロンホモビスフラバン－トリマー－４（ＯＨＢＦ－Ｔｒｉ－４）、およびウーロンホモビスフラバン－テトラマー－２（ＯＨＢＦ－Ｔｅｔ－２）の各々についてのグルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）阻害作用を、以下の手順により評価した。
　１％スクロース含有０．１％デキストランＴ１０を含む０．１Ｍ ＫＰＢ（ｐＨ６．０）２ｍＬに、実施例２により得られたｒＧＴＦＢまたはｒＧＴＦＣ（１５ｍＵ相当量（平均値））と、上記の各サンプル（０．０５ｍｇ／ｍＬ、最終濃度）を混和し、３７℃で一晩インキュベートした。得られた反応液の濁度（５５０ｎｍ）を測定することにより、非水溶性グルカンの生成量を測定した。非水溶性グルカンの生成量がより少ない（すなわち、濁度がより低い）ことは、グルコシルトランスフェラーゼの活性がより阻害されたことを示す。結果を図９および図１０に示す。なお、図中のコントロール（ｃｏｎｔ）は、上記サンプルを混和しない場合の濁度を示す。
　図９および１０に示されるとおり、ＥＧＣＧ４量体であるＴｅｔ－２は、ＧＴＦＣの活性をやや阻害したものの、ＧＴＦＢに対しては有意な阻害効果が認められなかった。一方、ＥＧＣＧ３量体であるＴｒｉ－１、Ｔｒｉ－２、およびＴｒｉ－４の各々については、ＧＴＦＢおよびＧＴＦＣの阻害作用が認められ、ＥＧＣＧ４量体であるＴｅｔ－２よりもＧＴＦＢの阻害活性が高かった。
　以上の結果より、ＥＧＣＧ３量体であるＴｒｉ－１、Ｔｒｉ－２、およびＴｒｉ－４、ならびにＥＧＣＧ２量体であるＯＨＢＦ－Ｂに高いＧＴＦ阻害作用がみられることが判った。特に、ＥＧＣＧ３量体であるＴｒｉ－１、Ｔｒｉ－２、およびＴｒｉ－４は、ＥＧＣＧの２量体であるＯＨＢＦ－Ａ、ＯＨＢＦ－Ｂ、およびＴＳＮ－Ａ、ならびにＥＧＣＧの４量体であるＴｅｔ－２に比べて、高いＧＴＦ阻害作用を有することがわかった。
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる重合ポリフェノールの定量
　トリマーおよびテトラマーのＬＣ－ＭＳ／ＭＳの測定条件とサントリー黒烏龍茶の定量
　ＥＧＣＧ重合物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳの測定は、４０００　Ｑ　ＴＲＡＰ（アプライド社製）で、ターボイオンスプレーを用い、以下の条件で測定した。Ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ　ｅｎｅｒｇｙ：４６ｅＶ（ｎｅｇａ．）、Ｉｏｎｓｐｒａｙ　ｖｏｌｔａｇｅ：４５００Ｖ、Ｔｅｍｐ：４５０℃。　
　各化合物のＭＲＭ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）における測定チャンネルはウーロンホモビスフラバン－トリマー類は、６９８．４０／１６８．９０（ｎｅｇａ．２価）で、標準物質にはウーロンホモビスフラバン－トリマー－１を用いた。ウーロンホモビスフラバン－テトラマー類は、９３３．１６／１６８．９０（ｎｅｇａ．２価）で標準物質にはウーロンホモビスフラバン－テトラマー－２を用いた。以下の測定条件で行った。
カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ　Ｃ３０－ＵＧ－３（野村化学、３ｍｍφ×１５０ｍｍ）
流速：０．３ｍｌ／ｍｉｎ、
カラム温度：４０℃
移動相Ａ：０．１％ＨＣＯＯＨ／Ｈ2Ｏ
移動相Ｂ：０．１％ＨＣＯＯＨ／ＣＨ3ＣＮ
グラジエントプログラム：Ａ９１％／Ｂ９％（０ｍｉｎ）→Ａ４０％／Ｂ６０％（１７ｍｉｎ）→Ａ１５％／Ｂ８５％（１７．１ｍｉｎ）、続いてＡ１５％／Ｂ８５％でアイソクラティック（１７．１～１９ｍｉｎ）　
　これらの化合物は黒烏龍茶中に微量しか含まれないため、直接定量することは不可能であった。そこで、黒烏龍茶（殺菌前）をＣＨＰ－２０Ｐカラム（三菱化学株式会社）でステップワイズに分画し、各フラクションの定量を行った後、各フラクションに検出された濃度を合算して茶中の濃度とした。黒烏龍茶中の濃度は、トリマー類は検出された５成分をウーロンホモビスフラバン－トリマー－１換算で合算し、１７２ｎｇ／ｍｌであった。テトラマー類は検出された４成分を合算し、ウーロンホモビスフラバン－テトラマー－２換算で５５ｎｇ／ｍｌであった。

Claims (11)

  1. 　エピガロカテキンガレート３量体またはその塩を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
  2. 　前記エピガロカテキンガレート３量体が、クロマン環の６位および／または８位でメチレン基を介して結合した化合物である、請求項１に記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
  3. [規則26に基づく補充 14.10.2009]　
    　前記エピガロカテキンガレート３量体が、次式（Ｉ）：
    Figure WO-DOC-CHEMICAL-1-1
    を有する化合物、次式（ＩＩ）：
    Figure WO-DOC-CHEMICAL-2-2
    を有する化合物、および次式（ＩＩＩ）：
    Figure WO-DOC-CHEMICAL-3-3
    を有する化合物
    （式（Ｉ）～（ＩＩＩ）中、Ｒは次式（Ａ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
    で表されるガロイル基である）
    からなる群から選択される化合物である、請求項２に記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
  4. [規則26に基づく補充 14.10.2009]　
    次式（ＩＶ）：
    Figure WO-DOC-CHEMICAL-5
    で表される化合物を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
  5. 　エピガロカテキンガレート３量体またはその塩を有効成分とする抗う蝕剤。
  6. 　前記エピガロカテキンガレート３量体が、クロマン環の６位および／または８位でメチレン基を介して結合した化合物である、請求項５に記載の抗う蝕剤。
  7. [規則26に基づく補充 14.10.2009]　
    　前記エピガロカテキンガレート３量体が、次式（Ｉ）：
    Figure WO-DOC-CHEMICAL-6
    を有する化合物、次式（ＩＩ）：
    Figure WO-DOC-CHEMICAL-7-7
    を有する化合物、および次式（ＩＩＩ）：
    を有する化合物
    （式（Ｉ）～（ＩＩＩ）中、Ｒは次式（Ａ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
    で表されるガロイル基である）
    からなる群から選択される化合物である、請求項６に記載の抗う蝕剤。
  8. [規則26に基づく補充 14.10.2009]　
    次式（ＩＶ）：
    Figure WO-DOC-CHEMICAL-10
    で表される化合物を有効成分とする抗う蝕剤。
  9. 　請求項１～８のいずれかに記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤を添加した飲食品。
  10. 　前記飲食品が茶飲料である、請求項９に記載の飲食品。
  11. 　請求項１～８のいずれかに記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤または抗う蝕剤を添加した口腔衛生剤。
PCT/JP2009/064335 2008-08-29 2009-08-14 エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤 WO2010024138A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES09809791.8T ES2619525T3 (es) 2008-08-29 2009-08-14 Inhibidor de la glucosiltransferasa que contiene un polímero de galato de epigalocatequina como principio activo
CN2009801339636A CN102137853B (zh) 2008-08-29 2009-08-14 以表没食子儿茶素没食子酸酯聚合物为有效成分的葡糖基转移酶抑制剂
US13/061,073 US9237996B2 (en) 2008-08-29 2009-08-14 Glucosyltransferase inhibitor containing epigallocatechin gallate polymer as active ingredient
EP09809791.8A EP2330104B1 (en) 2008-08-29 2009-08-14 Glucosyltransferase inhibitor containing epigallocatechin gallate polymer as active ingredient

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008-222851 2008-08-29
JP2008222851A JP5563753B2 (ja) 2008-08-29 2008-08-29 エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010024138A1 true WO2010024138A1 (ja) 2010-03-04

Family

ID=41721307

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2009/064335 WO2010024138A1 (ja) 2008-08-29 2009-08-14 エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤

Country Status (7)

Country Link
US (1) US9237996B2 (ja)
EP (1) EP2330104B1 (ja)
JP (1) JP5563753B2 (ja)
CN (1) CN102137853B (ja)
ES (1) ES2619525T3 (ja)
TW (1) TWI492765B (ja)
WO (1) WO2010024138A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020103133A (ja) * 2018-12-27 2020-07-09 太陽化学株式会社 歯垢形成予防剤

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI469779B (zh) * 2008-08-29 2015-01-21 Suntory Holdings Ltd Novel epigallocatechin gallate 4, and its vascular endothelial function enhancer
CN105342863B (zh) * 2015-12-11 2018-08-24 张凌 表没食子儿茶素没食子酸脂在提高牙科树脂粘接材料修复方面的应用
TW202037634A (zh) 2019-01-24 2020-10-16 日商住友精化股份有限公司 脂肪族聚碳酸酯
CN109879850B (zh) * 2019-02-26 2021-01-05 中国农业科学院茶叶研究所 一种制备三种聚酯型儿茶素单体的方法
CN114763551B (zh) * 2021-12-07 2023-09-15 西藏自治区农牧科学院农业研究所 一种青稞矢车菊素糖基转移酶基因及其用途

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03284671A (ja) 1990-03-30 1991-12-16 Suntory Ltd グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性の増強方法
JPH03284625A (ja) 1990-03-30 1991-12-16 Suntory Ltd 抗う蝕性物質の製造法及びその用途
JPH06247959A (ja) 1993-02-24 1994-09-06 Suntory Ltd フラボノイド重合物およびこれを有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤
JPH06279302A (ja) 1990-03-30 1994-10-04 Suntory Ltd 抗う蝕剤および抗う蝕性食品並びに抗う蝕性物質の製造方法
JPH07242556A (ja) 1994-03-08 1995-09-19 Suntory Ltd 抗う蝕性フラボノイド重合物およびこれを有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤並びに食品
JPH07285876A (ja) * 1993-12-06 1995-10-31 Nikka Uisukii Kk 果実ポリフェノールとその製造方法、酸化防止剤、血圧降下剤、抗変異原性作用剤、アレルギー抑制剤、抗う蝕剤及び消臭剤
JP2004244385A (ja) * 2003-02-14 2004-09-02 Pigeon Corp 防齲蝕性を有する乳幼児用の口腔内洗浄液
JP2005154432A (ja) * 2003-11-05 2005-06-16 Nichirei Corp ポリフェノールおよび／またはビタミンｃを含有するアセロラ処理物
JP2005336117A (ja) * 2004-05-27 2005-12-08 Suntory Ltd リパーゼ阻害活性および／または抗酸化活性を有するエピガロカテキン二量体および三量体
JP2007176845A (ja) * 2005-12-27 2007-07-12 Meiji Yakuhin Kk 柿ポリフェノール
JP2008517069A (ja) * 2004-10-19 2008-05-22 ユニゲン・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド 口腔疾患および状態の予防または処置に用いるための二重エイコサノイド系・サイトカイン系阻害剤の製剤
JP2009001531A (ja) * 2007-06-22 2009-01-08 Meiji Yakuhin Kk 柿ポリフェノールオリゴマー

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6011912B2 (ja) 1981-07-30 1985-03-28 日本新薬株式会社 タンニン
JPH01102022A (ja) 1987-10-14 1989-04-19 Advance Co Ltd 肥満予防剤
JP2975380B2 (ja) 1989-08-30 1999-11-10 三井農林株式会社 プラーク形成阻害剤
JPH03201947A (ja) * 1989-12-29 1991-09-03 Ajinomoto Co Inc デザート類食品
JPH03219872A (ja) 1990-01-25 1991-09-27 Meiji Seika Kaisha Ltd リパーゼ阻害剤
JPH03228664A (ja) 1990-02-02 1991-10-09 Meiji Seika Kaisha Ltd 脂質の消化吸収抑制機能を有する食品
ES2077703T3 (es) * 1990-03-30 1995-12-01 Suntory Ltd Inhibidores de la glucosiltransferasa, asi como metodos para la prevencion de la caries dental y alimentos anticaries que utilizan estos inhibidores.
JP2598873B2 (ja) 1993-08-25 1997-04-09 株式会社ロッテ リパーゼ阻害剤およびこれを添加した飲食品
CA2128293C (en) * 1993-12-06 2002-09-03 Masayuki Tanabe Fruit polyphenols and medicinal compositions containing them
JP3532999B2 (ja) * 1995-03-24 2004-05-31 株式会社ロッテ 新規なタンニン類およびこれを有効成分とするリパーゼ阻害剤
JP3828953B2 (ja) 1995-05-24 2006-10-04 日本製粉株式会社 リパーゼ阻害剤
EP0815857B1 (en) * 1995-12-26 2004-09-29 Suntory Limited Antiobestic agent containing procyanidin as the active ingredient
JP2926471B2 (ja) * 1996-01-19 1999-07-28 義郎 中松 交通事故防止等用飴
JPH10175874A (ja) * 1996-12-19 1998-06-30 Suntory Ltd 抗アレルギー剤
JP4507027B2 (ja) 1998-12-04 2010-07-21 明治乳業株式会社 Ｍｍｐ阻害剤
US8945518B2 (en) * 2002-04-30 2015-02-03 Unigen, Inc. Formulation of dual eicosanoid system and cytokine system inhibitors for use in the prevention and treatment of oral diseases and conditions
EP2193723A4 (en) * 2007-09-11 2013-09-11 Suntory Holdings Ltd FOOD OR BEVERAGE WITH IMPROVED SWEETMARK
CN102137662B (zh) * 2008-08-29 2017-02-08 三得利控股株式会社 含有新型表没食子儿茶素没食子酸酯三聚体及表没食子儿茶素没食子酸酯聚合物的α‑葡萄糖苷酶抑制剂

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03284671A (ja) 1990-03-30 1991-12-16 Suntory Ltd グルコシルトランスフェラーゼ阻害活性の増強方法
JPH03284625A (ja) 1990-03-30 1991-12-16 Suntory Ltd 抗う蝕性物質の製造法及びその用途
JPH06279302A (ja) 1990-03-30 1994-10-04 Suntory Ltd 抗う蝕剤および抗う蝕性食品並びに抗う蝕性物質の製造方法
JPH06247959A (ja) 1993-02-24 1994-09-06 Suntory Ltd フラボノイド重合物およびこれを有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤
JPH07285876A (ja) * 1993-12-06 1995-10-31 Nikka Uisukii Kk 果実ポリフェノールとその製造方法、酸化防止剤、血圧降下剤、抗変異原性作用剤、アレルギー抑制剤、抗う蝕剤及び消臭剤
JPH07242556A (ja) 1994-03-08 1995-09-19 Suntory Ltd 抗う蝕性フラボノイド重合物およびこれを有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤並びに食品
JP2004244385A (ja) * 2003-02-14 2004-09-02 Pigeon Corp 防齲蝕性を有する乳幼児用の口腔内洗浄液
JP2005154432A (ja) * 2003-11-05 2005-06-16 Nichirei Corp ポリフェノールおよび／またはビタミンｃを含有するアセロラ処理物
JP2005336117A (ja) * 2004-05-27 2005-12-08 Suntory Ltd リパーゼ阻害活性および／または抗酸化活性を有するエピガロカテキン二量体および三量体
WO2005116005A1 (ja) 2004-05-27 2005-12-08 Suntory Limited リパーゼ阻害活性および／または抗酸化活性を有するエピガロカテキン二量体および三量体
JP2008517069A (ja) * 2004-10-19 2008-05-22 ユニゲン・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド 口腔疾患および状態の予防または処置に用いるための二重エイコサノイド系・サイトカイン系阻害剤の製剤
JP2007176845A (ja) * 2005-12-27 2007-07-12 Meiji Yakuhin Kk 柿ポリフェノール
JP2009001531A (ja) * 2007-06-22 2009-01-08 Meiji Yakuhin Kk 柿ポリフェノールオリゴマー

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEM. PHARM. BULL, vol. 37, no. 12, 1989, pages 3255 - 3563
FUMIO HASHIMOTO ET AL.: "Tannins and Related Compounds. XC. : 8-C-Ascorbyl (-)- Epigallocatechin 3-O-Gallate and Novel Dimeric Flavan -3-ols, Oolonghomobisflavans A and B, from Oolong Tea. (3)", CHEM. PHARM. BULL., vol. 37, no. 12, 1989, pages 3255 - 3263, XP000654502 *
HAMADA S., FEMS MICROBIOLOGY LETTERS, vol. 143, 1996, pages 35 - 40
HASHIMOTO, F. NONAKA; G. NISHIOKA, I., CHEM. PHARM. BULL., vol. 36, no. 5, 1988, pages 1676 - 1684
M. MATSUMOTO ET AL., FEMS MICROBIOLOGY LETTERS, vol. 228, 2003, pages 73 - 80
MATSUMOTO M., FEMS MICROBIOLOGY LETTERS, vol. 228, 2003, pages 73 - 80
NAKAHARA K., APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 59, no. 4, 1993, pages 968 - 973
OOSHIMA T.; HAMADA S., THE NIPPON DENTAL REVIEW, no. 622, August 1994 (1994-08-01), pages 179 - 189
OTAKE S., CARIES RES., vol. 25, 1991, pages 438 - 443
See also references of EP2330104A4

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020103133A (ja) * 2018-12-27 2020-07-09 太陽化学株式会社 歯垢形成予防剤
JP7345250B2 (ja) 2018-12-27 2023-09-15 太陽化学株式会社 歯垢形成予防剤

Also Published As

Publication number Publication date
EP2330104B1 (en) 2017-03-01
US20110150790A1 (en) 2011-06-23
TW201014837A (en) 2010-04-16
JP5563753B2 (ja) 2014-07-30
US9237996B2 (en) 2016-01-19
CN102137853A (zh) 2011-07-27
CN102137853B (zh) 2013-11-06
ES2619525T3 (es) 2017-06-26
EP2330104A1 (en) 2011-06-08
JP2010053110A (ja) 2010-03-11
TWI492765B (zh) 2015-07-21
EP2330104A4 (en) 2011-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7989492B2 (en) Epigallocatechin dimers or trimers having lipase inhibitory activity and/or antioxidant activity
TWI469779B (zh) Novel epigallocatechin gallate 4, and its vascular endothelial function enhancer
WO2010024138A1 (ja) エピガロカテキンガレート重合体を有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤
RU2433824C2 (ru) Продукты присоединения сахаров к флавоноидам, способ их получения и применение
TWI529165B (zh) Novel epigallocatechin gallate 3-mer, and the use of alpha-glucosidase inhibitors containing epigallocatechin gallate polymers
JPWO2003094878A1 (ja) ガロカテキンガレート含有組成物
US7939116B2 (en) Sulfur-containing proanthocyanidin oligomer composition and production method thereof
TW201109018A (en) Anti-obesity agent comprising compound containing benzotropolone ring
JP6347734B2 (ja) 茶由来シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤
KR20180042795A (ko) 신규한 퀘르세틴계 화합물을 포함하는 인지기능 개선용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200980133963.6

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09809791

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13061073

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2009809791

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2009809791

Country of ref document: EP